一、標準概述

氯硝柳胺（Niclosamide）是一種水楊酰胺類衍生物，在我國被批準用作清塘劑，用于水產養殖前的池塘清塘處理。然而，氯硝柳胺對魚類、蝌蚪、螺類等具有明顯毒性，對人體也能誘導產生血管舒張等相關的副作用。因此，準確測定水產品中氯硝柳胺的殘留量，對于保障食品安全和消費者健康具有重要的現實意義。

GB 31656.7-2021《食品安全國家標準 水產品中氯硝柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》 是由中華人民共和國農業農村部、國家衛生健康委員會和國家市場監督管理總局聯合發布的一項食品安全國家標準。該標準于2021年9月16日發布，2022年2月1日正式實施，按照GB/T 1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。

該標準由中國水產科學研究院長江水產研究所艾曉輝研究員牽頭制定，系首次發布。標準共12頁，規定了水產品中氯硝柳胺殘留量檢測的制樣和液相色譜-串聯質譜測定方法，適用于魚、蝦、鱉等水產品可食組織中氯硝柳胺殘留量的檢測。

該標準的發布，填補了我國水產品中氯硝柳胺殘留量測定標準的空白，為我國水產品中氯硝柳胺殘留的監控和風險評估提供了具有法律效力的技術支撐。

二、氯硝柳胺及其檢測意義

2.1 氯硝柳胺的基本情況

氯硝柳胺（Niclosamide，CAS號：50-65-7），化學名為4′-硝基-2′，5-二氯水楊酰苯胺，分子式為C??H?Cl?N?O?。它是一種高效、低毒、對環境影響較小的滅螺劑（molluscicide），是世界衛生組織（WHO）推薦使用的唯一滅螺藥。

2.2 氯硝柳胺在水產養殖中的應用與風險

在水產養殖領域，氯硝柳胺被批準用作清塘劑，用于在放養前清除池塘中的野雜魚、蝌蚪、螺類等有害生物。然而，氯硝柳胺具有較強的魚毒性，若使用不當或清塘后間隔時間不足，可能導致藥物殘留于水產品可食組織中，對人體健康構成潛在威脅。

因此，建立科學、規范的氯硝柳胺殘留檢測方法，對于監控水產品質量安全、保障消費者健康以及應對水產品國際貿易中的技術性貿易壁壘均具有重要意義。

三、方法原理

GB 31656.7-2021所采用的核心技術是液相色譜-串聯質譜法（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, LC-MS/MS）。其基本原理可概括為以下步驟：

第一步：提取——水產品可食組織中的氯硝柳胺用有機溶劑（如乙腈）進行提取，使目標物從生物組織中轉移到溶劑相中。

第二步：凈化——提取液經分散固相萃取（如PSA、C18吸附劑）凈化，去除組織中的蛋白質、脂肪、色素等干擾物質。凈化后的溶液經0.22 μm有機濾膜過濾。

第三步：色譜分離——凈化后的樣品溶液注入液相色譜系統，以C18反相色譜柱進行分離。采用水-乙腈體系為流動相進行洗脫。

第四步：質譜檢測——分離后的氯硝柳胺進入串聯質譜儀，采用電噴霧電離（Electrospray Ionization, ESI）技術離子化，以選擇反應監測（Selected Reaction Monitoring, SRM）或多反應監測（Multiple Reaction Monitoring, MRM）模式采集數據。該模式通過選擇特定的母離子→子離子對進行監測，大幅提升了檢測的選擇性和靈敏度。

第五步：定量——采用外標法或內標法定量，通過比較樣品中氯硝柳胺峰的保留時間和質譜離子對信息與標準品的一致性進行定性，通過峰面積進行定量。

這一方法的核心優勢在于液相色譜與串聯質譜的聯用：液相色譜提供了優異的分離能力，串聯質譜則提供了極高的靈敏度和選擇性，兩者結合使該方法能夠在魚、蝦、鱉等復雜水產品基質中準確定量氯硝柳胺殘留。

四、試劑與材料

標準對實驗用試劑和材料有嚴格規定，這是保證檢測結果準確性的基礎。

用水要求：實驗用水應符合GB/T 6682規定的相關要求。

主要試劑：

標準品：

·         氯硝柳胺標準品（Niclosamide，CAS號：50-65-7），含量≥96.0%

標準溶液配制：

·         標準儲備液（0.1 mg/mL） ：取氯硝柳胺標準品10 mg，精密稱定，加乙腈10 mL超聲使溶解，用乙腈稀釋定容至100 mL棕色容量瓶，搖勻。-18℃以下保存，有效期2個月。

·         標準工作液（1 μg/mL） ：準確量取標準儲備液1 mL，于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。-18℃以下保存，有效期1個月。

抽樣規范：標準規范性引用GB/T 30891-2014《水產品抽樣規范》。

五、儀器與設備

標準要求配備以下核心設備：

典型色譜條件（參考相關文獻）：

典型質譜條件：

·         電離方式：電噴霧電離（ESI），負離子模式

·         采集模式：選擇反應監測（SRM）或多反應監測（MRM）

六、分析步驟

1. 試樣制備

魚、蝦、鱉等水產品需取可食組織（如肌肉等），經勻漿處理，充分混勻。

2. 樣品前處理

前處理是該方法的關鍵環節。典型流程如下：

·         稱樣：準確稱取5.0 g勻漿后的樣品

·         提取：加入乙腈（或氨化乙腈）振蕩提取

·         離心：高速離心使固形物沉淀，取上清液

·         凈化：上清液經PSA、C18吸附劑等分散固相萃取凈化

·         過濾：凈化后的溶液經0.22 μm有機濾膜過濾

·         待測：濾液供液相色譜-串聯質譜儀分析

3. 色譜-質譜分析

將處理好的樣品溶液注入液相色譜-串聯質譜儀，在優化的色譜和質譜條件下進行分離和檢測。通過對比樣品中氯硝柳胺峰的保留時間和質譜離子對信息與標準品的一致性進行定性確認，通過峰面積進行定量測定。

4. 標準曲線繪制

將氯硝柳胺標準工作液逐級稀釋成一系列濃度的標準溶液，分別進樣測定，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

5. 結果計算

根據樣品測定得到的峰面積，從標準曲線上查得相應的氯硝柳胺濃度，再結合樣品稱樣量、定容體積等參數，計算樣品中氯硝柳胺的實際含量。

七、方法優勢與應用價值

GB 31656.7-2021所規定的液相色譜-串聯質譜法具有以下顯著優勢：

1. 填補標準空白：該標準是我國水產品中氯硝柳胺殘留量測定的首個專項國家標準。在此之前，水產品中氯硝柳胺殘留檢測缺乏統一的方法標準，該標準的發布為相關檢測工作提供了權威的技術依據。

2. 靈敏度高：串聯質譜的SRM/MRM模式具有極高的檢測靈敏度，能夠滿足水產品中氯硝柳胺痕量殘留的檢測需求。

3. 選擇性好：液相色譜-串聯質譜聯用技術結合了色譜的分離能力和質譜的質量分辨能力，即使在魚、蝦、鱉等復雜水產品基質中，也能準確識別和定量氯硝柳胺。

4. 適用范圍明確：標準適用于魚、蝦、鱉等主要養殖水產品的可食組織，覆蓋了我國水產養殖的主要品種。

5. 服務國際貿易：該標準為水產品出口提供了符合國際規范的技術支撐，有助于應對國際貿易中的技術性貿易壁壘。

6. 保障消費者健康：氯硝柳胺對人體具有血管舒張等副作用。該標準的實施為水產品中氯硝柳胺殘留的監控和風險評估提供了技術保障。

八、注意事項

在實際應用中，檢測人員需特別注意以下幾點：

1. 樣品代表性：魚、蝦、鱉等水產品個體間可能存在差異，取樣應確保代表性。應按照GB/T 30891-2014《水產品抽樣規范》 進行抽樣。

2. 標準品的保存：氯硝柳胺標準儲備液（0.1 mg/mL）需在-18℃以下保存，有效期為2個月；標準工作液（1 μg/mL）同樣需在-18℃以下保存，有效期為1個月。檢測人員應注意在有效期內使用，避免因標準品降解導致定量偏差。

3. 前處理過程的把控：提取應充分，凈化應徹底。水產品組織中含有大量蛋白質、脂肪等基質成分，凈化不充分可能導致基質效應干擾檢測結果，甚至污染色譜柱和質譜儀。

4. 試劑和用水質量：乙腈等有機溶劑應為色譜純，水應符合GB/T 6682的要求。試劑中的雜質可能影響色譜分離效果和質譜檢測的靈敏度。

5. 質譜參數的優化：質譜參數（如離子化電壓、碰撞能量、錐孔電壓等）需根據實際儀器的狀態進行適當優化。不同品牌和型號的儀器可能存在差異，檢測人員應建立適合自身儀器的最優參數。

6. 基質效應的評估：水產品基質復雜，可能存在明顯的基質效應。建議采用基質匹配標準曲線或內標法進行定量，以校正基質效應帶來的偏差。

7. 色譜柱的維護：水產品提取液即使經過凈化，仍可能含有微量殘留雜質。應定期對色譜柱進行再生和維護，發現柱壓升高或分離效果下降時，應及時更換保護柱或清洗色譜柱。

九、總結

GB 31656.7-2021《食品安全國家標準 水產品中氯硝柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》以液相色譜-串聯質譜法為核心技術，為魚、蝦、鱉等水產品可食組織中氯硝柳胺殘留量的測定提供了一套科學、規范、高靈敏度、高選擇性的分析方法。該標準由農業農村部、國家衛生健康委員會和國家市場監督管理總局聯合發布，中國水產科學研究院長江水產研究所牽頭制定，具有較高的權威性。

氯硝柳胺作為水產養殖中常用的清塘劑，其殘留問題直接關系到水產品質量安全和消費者健康。該標準的首次發布，填補了我國水產品中氯硝柳胺殘留量測定標準的空白，為我國水產品中氯硝柳胺殘留的監控和風險評估提供了具有法律效力的技術支撐。

對于水產養殖企業、水產品加工企業、檢測機構和食品安全監管部門而言，深入理解和正確應用這一標準，不僅是滿足合規要求的必要前提，更是保障水產品質量安全、維護消費者健康權益、應對國際貿易技術壁壘的重要技術手段。檢測人員應嚴格按照標準規定的操作步驟開展檢測工作，特別注意樣品前處理、標準品保存和質譜參數優化等關鍵環節，確保檢測結果的準確性和可靠性。